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PCR仪的类型及常见的聚合酶链反应

更新时间:2019-06-07 22:01

 PCR仪是用于扩增基因组DNA的常用科学工具,由于其特异性和敏感性,在实验室中使用不同类型的PCR,用于定性和定量测试,PCR步骤涉及去成熟,退火和延伸,使用引物,Taq聚合酶和核苷酸。
 
    1、巢式PCR
    巢式PCR是聚合酶链反应的改进,旨在提高特异性,它减少了lol英雄联盟竞猜平台的非特异性结合,巢式PCR使用两组引物。一种用于聚合酶链式反应的第一反应,第二次用于第一次反应的产物中以扩增目的。在巢式PCR的第一步中,通过使用第一组引物扩增靶DNA。第一步的产物通过第二组引物扩增。两次设定的引物是第一步产物的互补。使用两组PCR引物的目的是减少产物的污染并改善其特异性。
   
    2、定量PCR
    定量PCR也称为实时PCR,是高度敏感和可重现的技术,该技术可以定量和半定量使用。这是PCR仪所涉及的基本原理,PCR仪是一种与PCR相关的仪器,有助于PCR反应,常用的检测方法是使用DNA插入的荧光染料,这是一个实验室过程。该过程包括定量扩增。定量PCR的优点包括快速检测HCV,HBV等病毒感染
,高度敏感,可重复,减少污染,给定量结果,是软件驱动的操作。
 
    3、多重PCR
    在PCR的单个步骤中扩增几个基因组DNA序列,多个引物和DNA聚合酶与PCR仪一起使用,。该PCR用于在单一反应中检测不同的病原体。对于多重PCR,引物的设计是不同的。为了扩增DNA模板的特定序列,单模板PCR使用具有多个正向和反向引物的单一模板。多模板PCR可以在单个反应中使用多个模板和几个正向和反向引物。用于多重PCR设计的引物,长度约为18-22个碱基对。多重PCR的优点包括比其他PCR高效,扩增子提供内部控制,逆转录酶聚合酶链反应,逆转录酶PCR用于从RNA合成cDNA。
 
    4、逆转录酶PCR原理
    第一步使用逆转录酶从RNA形成cDNA,在下一步中使用PCR扩增cDNA。并且单链cDNA转化为双链DNA,整个过程的要点是mRNA的纯化。在单步法中,cDNA的转化和扩增在单个反应管中发生,并且在2步法中cDNA和扩增在不同的管中进行,2步法比单步法更方便。提取RNA,将提取的物质加入反应混合物中,如果存在靶标,引物用于使RNA链退火,逆转录酶将mRNA转化为cDNA,引物延伸该链,温度保持90度,降低温度以使新形成的cDNA退火,新DNA由聚合酶合成,许多副本由多个循环形成。

文章来源:上海靳澜仪器制造有限公司/changgui/index.html
 

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