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PCR仪反应原理及有哪些应用

更新时间:2019-06-10 11:13

    PCR是扩增特定DNA片段的有效方法,不同于宿主细胞内的克隆和繁殖,该过程完全在生物化学上进行,PCR使用酶DNA聚合酶,其指导单链DNA模板上脱氧核苷酸底物的DNA合成。当DNA聚合酶与较长的模板DNA退火时,DNA聚合酶将核苷酸添加到定制设计的寡核苷酸的游离羟基末端。因此,如果合成的寡核苷酸与含有与寡核苷酸互补区域的单链模板退火,DNA聚合酶可以使用寡核苷酸作为引物,并延长其末端以产生双链DNA的延伸区域。
 
    PCR仪用于分析临床标本中是否存在感染因子,包括HIV,肝炎,疟疾,炭疽等。PCR可以提供有关患者预后的信息,并预测对治疗的反应或抵抗,许多癌症特征在于某些基因的小突变,这就是PCR用于鉴定的原因。PCR用于分析许多遗传疾病中发生的突变,例如囊性纤维化,镰状细胞性贫血,苯丙酮尿症,肌营养不良。PCR也用于法医实验室,特别有用,因为只需要少量的原始DNA,例如,可以从一滴血液或一根头发中获得足够的DNA。PCR是克隆过程中必不可少的技术,其允许从微量模板链产生大量纯DNA,并进一步研究特定基因。PCR已被用于识别和探索进化生物学领域中物种之间的关系。在人类学中,被用来理解古代人类的迁徙模式。在考古学中,古生物学家常用PCR来检测灭绝物种,或数百万年冷冻保存化石的DNA。
 
    PCR基于使用DNA聚合酶合成与所提供的模板链互补的新DNA链的能力,需要引物,因为DNA聚合酶可以仅将核苷酸添加到预先存在的基团上,添加第一个核苷酸,然后DNA聚合酶通过添加更多核苷酸,来延长其产生双链DNA的延伸区域。PCR反应需要的组成包括DNA模板,从样品中分离出的双链DNA。DNA聚合酶,通常是一种热稳定的Taq聚合酶,在高温下不会迅速变性,并且可以在高约70°C的温度下发挥作用。寡核苷酸引物,短链单链DNA,其与靶序列的有义链和反义链的3'末端互补。脱氧核苷酸三磷酸盐,碱基A,T,G和C的单个单元为聚合提供能量,并为DNA合成提供构建?椤;撼逑低常竞图兀狣NA变性和复性提供最佳条件,对聚合酶活性,稳定性和保真度也很重要。将所有PCR组成混合在一起,并通过在自动化,独立的PCR仪中进行的一系列循环反应。
 
文章来源:上海靳澜仪器制造有限公司
 

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